Office of Academic Resources
Chulalongkorn University
Chulalongkorn University

Home / Help

Titleการโคลนยีนไซแลเนสจาก Streptomyces sp. PC22 / เฉลิมพล คุ้มพิทักษ์ = Cloning of xylanase gene from Streptomyces sp. PC22
Author Chalermpon Kumpitak
Imprint 2541
Connect tohttp://cuir.car.chula.ac.th/handle/123456789/9979
Descript ก-ฏ, 90 แผ่น : ภาพประกอบ, แผนภูมิ

SUMMARY

งานวิจัยนี้โคลนยีนไซแลเนสจาก Streptomyces sp. PC22 โดยใช้เซลล์เจ้าบ้านและพลาสมิดพาหะ 2 ระบบคือ Streptomyces lividans TK21 กับ pIJ699 หรือ pIJ702 และ E.coli DH5alpha กับ pUC18 ผลการวิจัยเมื่อใช้ Streptomyces lividans TK21 เป็นเซลล์เจ้าบ้านและ pIJ699 เป็นพลาสมิดพาหะ พบ 1 โคลนที่เสถียร ให้ชื่อโคลนนี้ว่า S-21 โดยให้แอคติวิตีของไซแลเนส 1.21 หน่วยต่อมิลลิลิตรซึ่งสูงกว่าเซลล์เจ้าบ้านประมาณ 2 เท่า แต่ไม่สามารถสกัด พลาสมิดได้ และเมื่อใช้ pIJ702 เป็นพลาสมิดพาหะพบ 1 โคลนที่ย่อยสลายไซแลนได้จากการคัดเลือกเบื้องต้นบนอาหารแข็ง แต่สูญเสียแอคติวิตีเมื่อเลี้ยงในอาหารเหลว และพาสมิดที่สกัดได้มีขนาดเท่ากับ pIJ702 แสดงว่ายีนไซแลเนสจาก Streptomyces sp. PC22 และ Streptomyces lividans TK21 มีความคล้ายคลึงกันมาก จึงทำให้เกิดริคอมบิเนชันและนำเข้าสู่โครโมโซมของเซลล์เจ้าบ้าน หรือเกิดรีคอมบิเนชันและสูญเสียยีนไป ดังกรณีที่ใช้ pIJ699 และ pIJ702 เป็นพลาสมิดพาหนะตามลำดับ เมื่อใช้ E.coli DH5alpha เป็นเซลล์เจ้าบ้าน พบ 1 โคลน ให้ชื่อว่า E-8 มีแอคติวิตีของไซแลเนส 0.25 หน่วยต่อมิลลิกรัมโปรตีน ซึ่งสูงกว่าเซลล์เจ้าบ้านประมาณ 3 เท่า และพบ รีคอมบิแนนท์พลาสมิดขนาดประมาณ 4.6 กิโลเบส โดยมีชิ้นดีเอ็นเอสอดแทรกประมาณ 1.9 กิโลเบส
Xylanase gene from Streptomyces sp. PC22 was cloned by using two host-vector systems which were Streptomyces lividans TK21 and pIJ699 or pIJ702 and E.coli DH5alpha and pUC18. With Streptomyces lividans TK21 as a host a host a stable clone, namely S-21 was obtained with pIJ699 as a cloning vector. Clone S-21 had xylanase activity of 1.21 U.ml-1 which was about 2 folds higher than that of the host. However, no plasmid was detected from this clone. With pIJ702 as a cloning vector, one clone showing clear zone on a selective xylan containing agar plate was obtained but it lost the xylanase activity upon cultivation in liquid medium. Futhermore, the plasmid from this clone showed similarity in size to pIJ702. The above results indicated that xylanase gene from Streptomyces sp. PC22 may be homologous to that of Streptomyces lividans TK21 causing recombination and integration or recombination and deletion as in the cases of pIJ699 and pIJ702 as cloning vectors, respectively. With E.coli DH5alpha as a host, a clone, namely E-8, showing narrow clear zone on a selective plate after exposing to chloroform was obtained. It had xylanase activity of 0.25 U.mg-1 of protein which was about 3 folds higher than of the host. Clone E-8 possessed a recombinant plasmid of about 4.6 kb which contained DNA insert of about 1.9 kb.


โคลนิง สเตรปโตมัยซิส อาหารเลี้ยงเชื้อ ไลแลนเนส

LOCATIONCALL#STATUS
Science Library : Thesisวพ.2541 / 2078CHECK SHELVES

Chulalinet's Book Delivery Request




Location



Office of Academic Resources, Chulalongkorn University, Phayathai Rd. Pathumwan Bangkok 10330 Thailand

Contact Us

Tel. 0-2218-2929,
0-2218-2927 (Library Service)
0-2218-2903 (Administrative Division)
Fax. 0-2215-3617, 0-2218-2907

Social Network

  line

facebook   instragram