Author	สมบัติ คงวิทยา, ผู้แต่ง
Title	การทำให้บริสุทธิ์บางส่วนและลักษณะสมบัติของโปรติเอส จากป่านศรนารายณ์ Agave sisalana / สมบัติ คงวิทยา = Partial purification and characterization of protease from sisal Agave sisalana / Sombat Kongwithtaya
Imprint	2541
Connect to	http://cuir.car.chula.ac.th/handle/123456789/72545
Descript	69 แผ่น : ภาพประกอบ, แผนภูมิ

เมื่อทำโปรติเอสจากป่านศรนารายณ์ Agave sisalana ให้บริสุทธิ์บางส่วนโดยการตกตะกอนด้วยแอมโมเนียมชัลเฟตที่ความเข้มข้นอิ่มตัว 25-80 เปอร์เช็นต์ แล้วนำไปทำโครมาโตกราฟีแบบคอลัมน์ด้วย Sephadex G-100 และ DEAE-cellulose พบว่านีแอคติวิตีจำเพาะ 4.32 ยูนิตต่อมิลลิกรัมโปรตีน มีความบริสุทธิเพิ่มขึ้น 25.41 เท่า และให้ผลผลิตเอนไซม์ 185.65 เปอร์เซ็นต์ เมื่อนำไปทดสอบแอคติวิตีหลังจากทำอิเลกโตโฟริซีลแบบ ไม่เสียสภาพด้วยเคซีน 0.5 เปอร์เซ็นต์ พบแทบแอคติวิตีเพียง 1 แทบ และเมื่อนำไปหาน้ำหนักโมเลกุล โดยวิธีเจลฟิลเตรชันโครมาโตกราฟีโดยใช้คอลัมน์ Sephadex G-100 พบว่าขนาดโมเลกุลของเอนไซม์นี้เท่ากับ 21,800 ดาลตัน pH และ อุณหภูมิที่เหมาะสมในการเร่งปฏิกริยาการย่อยสลายเคซีนของโปรติเอสนี้ คือ pH 7.5 และ 65 °ซ ตามลำดับ และมีความเสถียรที่ pH 8.3 และอุณหภูมิ 20-40°ซ จากการศึกษาด้านจลน์ศาสตร์พบว่าเอนไซม์นี้มีค่า Km ต่อ เคซีน BSA และฮีโมโกลบิน เท่ากับ 0.084, 0.161 และ 0.877 เปอร์เซ็นต์โดยน้ำหนัก ตามลำดับ เอนไซม์นี้ มีความจำเพาะต่อสับสเตรตที่เป็นเปปไทด์สังเคราะห์โดยจำเพาะต่อเปปไทด์ด้านคาร์บอกซิลของลิวซีน Mก2-และ Cd2* สามารถยับยั้งแอคติวิตีของเอนไซม์ได้เช่นเดียวกันกับ HgCI2,p-chloromercuricbenzoate และ lodoacetamide ในขณะที่ Na2S2O5 , diithiothetol และ 2-mercaptoethanol จะกระตุ้นแอคติวิตีของเอนไซม์ ผลข้างต้นนี้ ชี้ให้เห็นว่า โปรติเอสจากป่านศรนารายณ์นี้ควรจะเป็น sulfhydryl protease
Protease from A. sisalana was partial purified by precipitation by 25-80 % ammoniumsuifete precipitation, Sephadex G-100 column and DEAE -cellulose column chromatography. The purification obtained was 25.41 fold with specific activity of 4.32 Units/mg protein and %yeild of 186.65 %. Activity stain after non- denaturing gel electrophoresis with 0.5% casein as substrate showed a single band The molecular weight of 21,800 was shown with Sephadex G-100 column chromatography. The pH optimum of this enzyme was 7.5 and the temperature optimum was 65 °C, the enzyme was stable at pH 8.3 and 20-40 °C, respectively. The kinetic study of partial purified enzyme showed Km of 0.084, 0.161 and 0.877 % by weight for casein, BSA and hemoglobin respectively. The enzyme also showed specificity towards peptide of G-terminal side of leucine. Mn2-, Cd2+ HgClr p-chloromercuricbenzoate and iodoacetamid could inhibit protease activity while Na2S2O5 , diithiothreitol and 2-mercaptoethanol, activated the enzyme. These results suggested that the enzyme from A. sisalana was sulfhydyl protease

1. ป่านศรนารายณ์
2. พฤกษเคมี
3. เอนไซม์โปรติเอส
4. Botanical chemistry
5. Proteolytic enzymes