Author	สมพร โชติเกษมสุข
Title	การพัฒนาระบบอิเล็กโทรโฟริซิส เพื่อวิเคราะห์โพลีมอร์ฟิคเอนไซม์บางชนิด สำหรับงานนิติเวชศาสตร์ในประเทศไทย / สมพร โชติเกษมสุข= Development of electrophoretic system for typing of some polymorphic enzymes for forensic science in Thailand / Somporn Chotekasemsuk
Imprint	2535
Connect to	http://cuir.car.chula.ac.th/handle/123456789/47930
Descript	[18], 150 แผ่น : ภาพประกอบ, แผนภูมิ

อิเล็กโทรโฟริซิส (electrophoresis) เป็นวิธีการทางชีวเคมีที่สามารถนำไปประยุกต์ใช้ในการวิเคราะห์โพลีมอร์ฟิคเอนไซม์ (polymorphic enzymes) ในงานตรวจพิสูจน์บุคคล งานวิจัยนี้มีจุดประสงค์ที่จะประเมินระบบอิเล็กโทรโฟริซิสต่างๆ ในการวิเคราะห์โพลิมอร์ฟิคเอนไซม์สามชนิดจากโลหิตของมนุษย์ เพื่อใช้ในงานดังกล่าว ได้แก่ฟอสโฟกลูโคมิวเตส(phosphoglucomutase, PGM), แอซิดฟอสฟาเตส (acid phosphatase, EAP) และ เอสเทอเรส ดี (esterase D, EsD) โดยเปรียบเทียบ ผลจากระบบ อิเล็กโทรโฟริซิสบนอะกาโรส, โพลีอะคริลาไมด์เจล และ ไอโซอิเล็กทริกโฟกัสซิงบนโพลีอะคริลาไมด์เจลโดย Vertical midget electrophoresis (VM – IEF), Horizontal mini IEF (HM – IEF) และ Horizontal chamber electrophoresis (H – IEF) ผลของงานวิจัยนี้แสดงให้เห็นว่า อิเล็กโทรโพริซิสบนอะกาโรสและสตาร์ชที่ pH 7.4 สามารถจำแนก PGM ออกได้เพียง 3 รูปแบบคือ PGM 1, PGM, 2 และ PGM 2-1 อิเล็กโทรโฟริซิสบนโพลีอะคริลาไมด์ระบบต่อเนื่องที่ pH 7.4 และ ระบบไม่ต่อเนื่องที่ pH 8.9 ไม่สามารถจำแนกไอโซไซม์ของ PGM ออกจากกันได้ ไอโซอิเล็กทริกโฟกัสซิงบนโพลีอะคริลาไมด์เจลที่ pH 5-7 โดย H – IEF และที่ pH 5.0 – 6.5 ซึ่งมี 1.2% EPPS โดย HM – IEF สามารถจำแนก PGM ออกได้ resolution สูงที่สุดและได้จำนวนถึง 10 รูปแบบคือ 1+, 1-, 1+1-, 2+, 2-, 2+2-, 1+2+, 1+2-, 1-2+ และ 1-2- ไอโซอิเล็กทริกโฟกัส ซิงบนโพลีอะคริลาไมด์เจลที่ pH 4-8 โดย H – IEF และที่ pH 5.0-6.5 โดย HM – IEF สามารถจำแนก EAP ออกได้เป็น 3 รูปแบบคือ A, B และ BA การพัฒนระบบนี้โดยการเพิ่ม 3.14% HEPES สามารถจำแนก EAP และ EsD ได้พร้อมกันโดยจำแนกออกได้เป็น 5 รูปแบบคือ EsD 1, EsD 2, Esd 2.1, EsD 5.1 และ EsD 5.2จากการศึกษาความเสถียรของ PGM, EAP และ EsD พบว่า PGM มีความเสถียรสูงกว่า EAP และ EsD อายุสูงสุดของคราบโลหิตที่ยังสามารถนำมาวิเคราะห์รูปแบบเอนไซม์ทั้งสามได้ คือ 105, 21 และ 12 วัน ตามลำดับ
ได้ศึกษาการกระจายของ PGM, EAP และ EsD ในประชากรไทยด้วยระบบไอโซอิเล็กทริกโฟกัสซิงบนโพลีอะคริลาไมด์เจลที่ pH 5-7 และ pH 4-8 โดย H – IEF จากโลหิต 250 ตัวอย่าง พบว่า gene frequency ของ PGM1คือ PGM1 (0.596), PGM11- (0.126), PGM12+(0.162) และ PGM12- (0.116) gene frequency ของEAP คือ pA (0.292) และ pB (0.708) และ gene frequency ของ EsD 1 (0.688), EsD 2 (0.306) และ EsD 5 (0.006) ส่วนอำนาจในการจำแนก (discriminating power, DR) ของ PGM, EAP และ EsD เท่ากับ 0.79, 0.57 และ 0.59 ตามลำดับ และ DP รวมของทั้งสามเอนไซม์มีค่าสูงถึง 0.96
Electrophoresis is a biochemical method applicable for polymorphic enzyme analysis for blood individualization. The object of this work is to evaluate the most appropriated electrophoretic system for typing human blood phosphoglucomutase (PGM), erythrocyte acid phosphatase (EAP) and esterase D (EsD). The evaluation was performed on agarose and polyacrylamide gel electrophoretic systems and polyacrylamide gel isoelectric focusing. The latter was by vertical midget electrophoresis (VM – IEF), horizontal mini IEF (HM – IEF) and horizontal chamber electrophoresis (H – IEF). PGM1 isozymes could be resolved by agarose-starch gel electrophoresis at pH 7.41 into 3 subtyes : PGM1 1, PGM1 2 and PGM1 2-1. Polyarylamide gel electrophoresis (PAGF) with continuous system at pH 7.4 or with discontinuous system at pH 8.9 failed to resolve the isoenzyme. The best resolution with 4 isozymes of 10 subtypes : 1+, 1-, 1+1, 2+, 2-, 2+2-, 1+2-, 1-2+ and 1-2- was obtained from isoelectric focusing (IEF) on polyacrylamide gel at pH 5-7 by H – IEF and at pH 5.0 – 6.5 with 1.2% EPPS by HM – IEF. EAP isozymes could be resolved into 3 subtypes : A, B and BA by isoelectric focusing on polyacrylamide gel at pH 4-8 by H – IEF and at pH 5.0 – 6.5 by HM – IEF. By the same system with 3.14% HEPES addition, EAP and EsD could be typed simultaneously. The latter could be resolved into 5 subtypes : EsD 1, EsD 2, EsD 2.1, EsD 5.1 and EsD 5.2. In stability study, PGM was the most stable polymorphic enzyme. The ages of these three enzymes which were still typeable were 105, 21 and 12 days, respectively. Gene frequency of PGM, EAP and EsD obtained by isoelectric focusing on polyacrylamide gel1+ at pH 5-7 and 4-8, determined from 250 samples of Thai population were PGM11+ (0.598), PGM11- (0.126), PGM12+ (0.162), PGM12- (0.116), PA (0.292), PB (0.708), EsD1 (0.688) and EsD5 (0.006) respectively. Discriminating power of PGM1, EAP and EsD were 0.79, 0.57 and 0.59, respectively. The total discriminating power resulted from these three polymorphic enzyme typing was 0.96.